Separace a charakterizace atelokolagenu
Loading...
Date
Authors
ORCID
Advisor
Referee
Mark
A
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract
Cílem předložené bakalářské práce byla optimalizace separace rozpustného atelokolagenu z komerčně dostupného hovězího kolagenu a jeho následná charakterizace. Kollagen byl podroben enzymatickému trávení pomocí pepsinu a následně přečištěn pomocí filtrace, centrifugace a dialýzy. Získané vzorky byly následně charakterizovány pomocí infračervené spektrometrie, elektroforézy v polyakrylamidovém gelu a Hartree-Lowryho metody pro stanovení celkového obsahu proteinů. Vhodný časový rozsah enzymatického trávení pro získání vyhovujících výtěžků, byl určen na 60 – 70 hodin při hmotnostním poměru pepsinu a kolagenu 1:25. Nejvyšší výtěžek (72.6 %) byl získán při tomto poměru a době reakce 66 hodin. Dostatečné filtrace, která byla pro čistotu produktu klíčová, byla zajištěna kombinací filtračních technik s následnou centrifugací. Kvalita produktů z hlediska molekulových hmotností byla charakterizována pomocí gelové elektroforézy. Rozpustnost a její závislost na pH a koncentraci NaCl v roztoku byla měřena pomocí Hartree – Lowryho metody. Poměr mezi helikálním kolagenem a denaturovaným kolagenem ve vzorku byl měřen pomocí infračervené spektroskopie. Výsledná spektra se však nejevila zcela věrohodná. Jako vhodnější metodu pro zkoumání struktury kolagenu je možné použít například metodu cirkulárního dichroismu.
The aim of the presented bachelor thesis was to optimize separation of soluble atelocollagen out of commercially available bovine collagen and its characterization. Collagen went through an enzymatic digestion using pepsin as a protease and subsequently purified by filtration, centrifugation and dialysis. Obtained samples were characterized using infrared spectrometry, polyacrylamide gel electrophoresis and Hartree-Lowry assay for total protein determination. Suitable digestion time range to gain sufficient yields was decided from 60 – 70 hours at pepsin/collagen weight ratio 1:25. Highest yield (72.6 %) was obtained at mentioned ratio after 66 hours of reaction. Sufficient filtration, which was decisive for final product purity, was assured by combination of several filtration techniques with centrifugation. Quality of prepared product according to their molecular weight was characterized by gel electrophoresis. Solubility and its dependence on pH and NaCl concentration in solution were measured by Hartree – Lowry assay. Ratio between helical collagen and denaturated collagen was measured by infrared spectroscopy. Obtained spectra yet did not seem fully reliable and provided only a rough estimate. More accurate information about structure could be achieved by using circular dichroism spectroscopy.
The aim of the presented bachelor thesis was to optimize separation of soluble atelocollagen out of commercially available bovine collagen and its characterization. Collagen went through an enzymatic digestion using pepsin as a protease and subsequently purified by filtration, centrifugation and dialysis. Obtained samples were characterized using infrared spectrometry, polyacrylamide gel electrophoresis and Hartree-Lowry assay for total protein determination. Suitable digestion time range to gain sufficient yields was decided from 60 – 70 hours at pepsin/collagen weight ratio 1:25. Highest yield (72.6 %) was obtained at mentioned ratio after 66 hours of reaction. Sufficient filtration, which was decisive for final product purity, was assured by combination of several filtration techniques with centrifugation. Quality of prepared product according to their molecular weight was characterized by gel electrophoresis. Solubility and its dependence on pH and NaCl concentration in solution were measured by Hartree – Lowry assay. Ratio between helical collagen and denaturated collagen was measured by infrared spectroscopy. Obtained spectra yet did not seem fully reliable and provided only a rough estimate. More accurate information about structure could be achieved by using circular dichroism spectroscopy.
Description
Citation
KONEČNÁ, Z. Separace a charakterizace atelokolagenu [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2014.
Document type
Document version
Date of access to the full text
Language of document
cs
Study field
Chemie, technologie a vlastnosti materiálů
Comittee
prof. RNDr. Josef Jančář, CSc. (předseda)
prof. Ing. Jaromír Havlica, DrSc. (místopředseda)
prof. Ing. Ladislav Omelka, DrSc. (člen)
prof. Dr. Ing. Martin Palou (člen)
doc. RNDr. Jaroslav Petrůj, CSc. (člen)
prof. Ing. Petr Ptáček, Ph.D. (člen)
prof. Ing. Tomáš Svěrák, CSc. (člen)
Date of acceptance
2014-06-17
Defence
Uchazečka se ve své prezentaci zabývala separací rozpustného kolagenu ze směsi bovinního kolagenu a dalších proteinů. Výsledky byly velmi zajímavé a ověřená metoda je jednak zcela nová a navíc velmi účinná. Dotazy oponenta zodpověděla správně. Na dotazy členů komise reagovala pružně a její odpovědi byly správné.
Result of defence
práce byla úspěšně obhájena
Document licence
Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení