Kontrola kvasného procesu vinného moštu

Abstract

Tato diplomová práce se zabývá identifikací kvasinek izolovaných v průběhu kvašení vinného moštu. Pro analýzu byla vybrána odrůda révy vinné Rulandské modré pěstovaná v integrované vinici. V teoretické části jsou uvedeny základní informace o kvasinkách, jsou popsány rody nejčastěji se vyskytující v průběhu kvašení vinného moštu a metody identifikace kvasinek založené na PCR reakci. Pro identifikaci vinných kvasinek byla v experimentální části zvolena metoda PCR-RFLP. Amplifikace oblasti 5,8S-ITS rDNA byla provedena polymerázovou řetězovou reakcí za použití primerů ITS1 a ITS4. Získané amplikony byly podrobeny restrikční analýze, která byla provedena s pěti restrikčními endonukleázami: HaeIII, HinfI, Taq?, AluI, MseI. Pomocí restrikčních endonukleáz byly amplikony rozštěpeny na fragmenty, jejichž délka a počet je charakteristická pro daný druh. Separace fragmentů byla provedena elektroforeticky na agarózovém gelu a získané elektroforeogramy byly vyhodnoceny programem BioNumerics. Na základě UPGMA klastrové analýzy byly vytvořeny dendrogramy znázorňující genetickou podobnost izolovaných vinných kvasinek.

This thesis deals with identification of yeasts isolated during spontaneous fermentation of grape juice. For analysis the Pinot Noir grape variety grown in the integrated vineyard was chosen. In the theoretical part of this thesis basic information about yeasts are described. Genera of yeasts that occurs during fermentation process and methods based on PCR are also described. In this thesis PCR-RFLP method was used for identification of yeasts. The amplification of the 5,8S-ITS rDNA sequence was performed by the polymerase chain reaction with use of the primers ITS1 and ITS4. The restriction analysis was performed by applying five restriction endonucleases: HaeIII, HinfI, Taq?, AluI, MseI. The amplicons were split into fragments which length and number are typical for the particular species. These fragments were identified by agarose gel electrophoresis and electrophoreograms were evaluated by BioNumerics software. Dendrograms representing genetic similarity of isolated wine yeasts were created by using UPGMA cluster analysis.