Optimalizace nové mikrometody izolace DNA z potravin

Loading...
Thumbnail Image
Date
ORCID
Mark
A
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract
Diplomová práce byla zaměřena na optimalizaci mikrometody izolace DNA v kvalitě vhodné pro polymerázovou řetězovou reakci (PCR) pomocí magnetických mikročástic z potravin rostlinného původu. Pro analýzu byla vybrána červená řepa (čerstvá, mražená, sušená, sterilovaná) a potravinové výrobky obsahující červenou řepu. Byly porovnávány a optimalizovány různé způsoby zpracování homogenátů. Homogenáty byly připraveny v lyzačním pufru s cetyltrimethylamonium bromidem (CTAB) s různým množstvím NaCl bez a s přídavkem organického extrakčního činidla chloroform-oktanolu a isopropanolu. Mikroizolace DNA byla provedena pomocí magnetických částic P(GMA). Byla testována koncentrace NaCl a polyethylenglykolu (PEG) 6000 v separačních směsích. Byl porovnáván vliv na výtěžek a čistotu izolované DNA a navržen optimální poměr množství NaCl v CTAB pufru a koncentrace PEG 6000 v separační směsi. Optimální separační směs pro izolaci DNA z červené řepy byla aplikována na potravinové výrobky obsahující červenou řepu. Amplifikovatelnost DNA byla testována v konvenční PCR, kde byly použity specifické primery pro rostlinnou DNA. Produkty PCR o velikosti asi 700 bp byly detegovány pomocí agarózové gelové elektroforézy.
The thesis were focused on the optimalization of micromethod for isolation of DNA in quality for polymerase chain reaction (PCR) using magnetic microparticles from plant food products. There were chosen a red beetroot (fresh, frozen, dried and sterilized) for the analysis and food products containing red beetroot. Different approaches of processing of homogenates were compared and optimized. The homogenates were prepared in lysis buffer with cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) with different amounts of NaCl with or without addition of organic extraction agents chloroform-octanol and isopropanol. Microisolation of DNA was performed using magnetic particles P(GMA). The concentration of NaCl and polyethylene glycol (PEG) 6000 in separation mixtures was tested. The influence on quantity and purity of isolated DNA was compared and the optimum amounts of NaCl in CTAB buffer and optimal concentration of PEG 6000 in separation mixtures were compared. The optimized separation mixture for the DNA isolation from red beetroot was applied to food products containing red beetroot. Amplifiability of DNA was tested in conventional PCR using specific primers for plant DNA. PCR products of length 700 bp were detected by agarose gel electrophoresis.
Description
Citation
SURÁ, T. Optimalizace nové mikrometody izolace DNA z potravin [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2018.
Document type
Document version
Date of access to the full text
Language of document
cs
Study field
Potravinářská chemie a biotechnologie
Comittee
prof. RNDr. Ivana Márová, CSc. (předseda) doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (místopředseda) doc. Ing. Stanislav Obruča, Ph.D. (člen) doc. Ing. Bohuslav Rittich, CSc. (člen) doc. RNDr. Alena Španová, CSc. (člen) RNDr. Renata Mikulíková, Ph.D. (člen)
Date of acceptance
2018-06-04
Defence
1. Diplomantka seznámila členy komise s náplní a cílem diplomové práce. 2. Byly přečteny posudky na diplomovou práci. 3. Diplomantka akceptovala všechny připomínky oponenta a na všechny otázky odpověděla v plné šíři. Diskuse prof. Márová: Byla provedena senzorická analýza testovaných výrobků? Předpokládáte falšování červené řepy v produktech? doc. Obruča: Proč byla vybrána právě červená řepa? Máte ráda červenou řepu?
Result of defence
práce byla úspěšně obhájena
Document licence
Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení
DOI
Collections
Citace PRO