Kvasinky kolonizující povrchy listů a jejich identifikace

Abstract

Tato diplomová práce je zaměřena na optimalizaci a využití molekulárně-biologické metody PCR-RFLP k identifikaci a taxonomickému zařazení kvasinek kolonizujících povrchy listů, přičemž srovnává a nahrazuje postupy identifikace kvasinek stanovené na základě fyziologických a morfologických vlastností organismů. PCR-RFLP využívá schopnosti termostabilních polymeráz mnohonásobně amplifikovat specifický úsek v rDNA, který může být následně štěpen vhodnými restrikčními endonukleázami na charakteristické polymorfní fragmenty. Srovnáním délek fragmentů a výskytu štěpných míst, které jsou typické pro každý druh, byly získány požadované výsledky, které jsou přehledně shrnuty v závěrečné části práce. Teoretická část objasňuje a popisuje cytologii a morfologii kvasinek, taxonomii jako vědu, podrobněji se zabývá charakteristikou zkoumaných kvasinek rodu Cryptococcus, Rhodotorula a Saccharomyces a detailně popisuje metodiku PCR-RFLP.

This diploma thesis is focused on optimalization and employing the PCR-RFLP method, based on the molecular biology principles, for an identification and taxonomy of the yeasts which colonize the leaf surfaces. Simultaneously the yeasts identification techniques based on physiological and morfphological attributes are compared and replaced. PCR-RFLP takes advantage of thermostable polymerases´ ability to amplify the specific segment in the rDNA, which can be split by restriction endonucleases to characteristical polymorphical fragments. Comparing these fragments and restriction´s positions which are for each species unique, demanded results were obtained. They´re summarized in the conclusion part. The theoretical part describes the morphology and cytology of the yeasts, taxonomy as a science, genuses of examined yeasts Cryptococcus, Rhodotorula a Saccharomyces are covered more thoroughly and the method of PCR-RFLP is described in detail.