MACUCHOVÁ, S. Studium aktivity enzymových a nízkomolekulárních antioxidačních systémů [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2010.
Ing. Simona Macuchová je studentkou kombinované formy doktorského studijního programu "Fyzikální chemie". Studium zahájila 1.9.2004. V průběhu doktorského studia vícekrát změnila zaměstnavatele, přičemž disertační práce byla experimentálně řešena vesměs na příslušných pracovištích zaměstnavatele, což významně ovlivnilo výslednou strukturu a způsobilo jistou heterogenitu výsledků. Hlavní část práce byla řešena v laboratořích Výzkumného ústavu pivovarského a sladařského,a.s., Praha, kde pracovala ing. Macuchová jako vedoucí analytické laboratoře Sladařského ústavu Brno (2006-2008). V roce 2006 absolovovala ing. Macuchová zahraniční pobyt ve Slovinsku na Unoversitě v Ljubljane. V letech 2006-2008 pracovala ing. Macuchová souběžně v soukromé klinické laboratoři a v roce 2009 na plný úvazek jako technik na Oddělení klinické biochemie FN Brno. V klinických laboratořích byla zpracována druhá část experimentů. Od roku 2009 nastoupila jako obchodní zástupce pro ČR k firmě Randox Laboratories (GB) dodávající klinicko-diagnostické soupravy. Za FCH odborně zaštítil disertaci Ústav chemie potravin a biotechnologií FCH VUT v Brně. V červenci 2010 předložila ing. Macuchová disertační práci na téma "Studium aktivity enzymových a nízkomolekulárních antioxidačních systémů". V rámci doktorského studia (tj. od 1.9.2004) byly realizovány experimenty, doktorandka splnila veškeré předepsané zkoušky a v roce 2007 úspěšně složila i státní doktorskou zkoušku. Ing. Macuchová se na VÚPS podílela zásadně na rozvoji enzymových metod a aplikaci na různé typů biologického materiálu a v rámci klinických laboratoří na automatizaci vybraných metod. V laboratořích FCH i VÚPS zvládla rovněž řadu instrumentálních metod ke stanovení nízkomolekulárních antioxidantů (RP-HPLC, LC-MS, GC/FID, GC-MS, elektroforéza, izotachoforéza). Podílela se na řešení řady grantů, např. dílčích úkolů Výzkumného záměru MSM 6019369701 (VZ I/5 a VZ I/12) a NAZV MZe ČR a též interních grantů VÚPS. V průběhu řešení disertační práce a spolupráce s FCH se ing. Macuchová podílela na vedení diplomových a bakalářských prací. Dosažené výsledky byly prezentovány formou 10 publikací v mezinárodních časopisech s IF, dále 2 publikací v recenzovaných časopisech a rovněž formou 9 příspěvků uveřejněných formou full-textu a 23 příspěvků uvedených jako abstrakty sdělení prezentovaných na mezinárodních konferencích a konferencích s mezinárodní účastí konaných v ČR a SR. Získané výsledky zadaného tématu byly shrnuty v poměrně rozsáhlé disertační práci, která dokumentuje tvůrčí přístup k práci, značnou odbornou úroveň, zkušenost a přehled ing. Macuchové ve studované tématice v širších souvislostech. Vzhledem k výše uvedeným skutečnostem a v souladu s platnou legislativou doporučuji, aby byla disertační práce přijata k obhajobě a po jejím úspěšném obhájení byla Ing. Simoně Macuchové udělena vědecká hodnost Ph.D.
Předložená dizertační práce je experimentálně zaměřena a je členěna do 9 kapitol dle běžných zvyklostí. Celkem je sepsána na 147 stranách, je tvořena textem, tabulkami, grafy a obrázky. Úvod a Teoretická část zaujímá 43 stran. Cíle a Praktická část tvořená Materiálem a metodickými postupy jsou uvedeny na 16 stránkách. Kapitoly Výsledky a Diskuze zaujímají 60 stran. Závěry práce jsou uvedeny na 4 stranách. Kapitola Seznam literatury je tvořena 161 citacemi domácích a zahraničních autorů. Poslední kapitolu tvoří Použité zkratky a symboly. K Abstraktům jak v českém, tak i anglickém jazyce mám připomínku, že jsou uvedeny jen obecné informace bez konkrétních zjištění, zcela postrádám vyjádření závěrů a doporučení. Upozorňuji dizertantka na skutečnost, že použití slova "pěstěných" je zcela nevhodné, správně mělo být uvedeno pěstovaných. K Úvodu mám drobnou připomínku - v této kapitole se necitují autoři, chybně je v rozsahu celé práce používán pojem vitaminy - patří s krátkým i. Kapitola 2. Teoretická část je sepsána přehledně a plně vystihuje řešenou problematiku, je vhodně doplněna schématy a obrázky. K této části nemám připomínek. Cíle práce vystihují řešenou problematiku. Jsou formulovány 2 hlavní cíle, druhý je poté dělen na 5 dílčích. Vysoce oceňuji kapitolu Výsledky, jednak pro velké množství získaných dat za experimentální roky, dále použití validačních metod a statistického zpracování, velice pěkné zpracování grafů a tabulek. Výsledky jsou jednoznačně interpretovány a vycházejí z cílů dizertační práce. V tab. 24. Uvádíte soubor jedinců, myslíte si, že odchylkové hodnoty jsou správné, nebylo by lépe vyjádřit rozpětí souboru variačním koeficientem (CV%)? Tab. 4. a 26. se opakují. Samostatná kapitola Diskuse v takto zaměření dizertační práci je dle mého názoru nevhodná, byla by vhodnější u jednotlivých částí výsledků, odděleností se ztrácí přehlednost a tím možnost porovnávat získané hodnoty. Závěry vycházejí z uvedených výsledků, jsou výstižné, dle mého názoru správně interpretovány a mohou sloužit pro další zkoumání dané problematiky. Literatura vykazuje nejednotnost citací. Závěr Předložená dizertační práce paní Ing. Simony Macuchové splňuje po stránce vědecké, obsahové a formální požadavky stanovené příslušnými vyhláškami pro získání vědecko-akademické hodnosti. Na základě uvedeného navrhuji paní Ing. Simoně Macuchové po úspěšné obhajobě dizertační práce udělení vědecko-akademické hodnosti Ph.D. ve studijním oboru Fyzikální chemie (1404V001).
Predkladaná dizertačná práca Ing. Simony Macuchovej sa zaoberá problematikou zapojenia niektorých enzýmov a nízkomolekulových metabolitov do anitoxidačných systémov v biologických matriciach. Práca je zameraná aj na vývoj vhodných metód detekcie aktivít vytipovaných enzýmov. Ako biologické modely pre tieto štúdie boli zvolené rastlinné materiály (jačmeň, slad) a ľudské krvné sérum. Dizertačná práca je na 147 stranách klasicky členená. Teoretická časť zahŕňa dôležité poznatky zo svetovej literatúry o reaktívnych formách kyslíka a dusíka, antioxidačnom ochrannom systému buniek, ako aj oboznamuje čitateľa s metódami posudzovania a stanovovania enzýmov a metabolicky aktívnych látok zapojených do antioxidačných mechanizmov v biologických matriciach. Obrázky, náčrty a reakčné schémy vhodne dopĺňajú text. Ciele práce sú jasne formulované, podobne aj celá metodologická časť je písaná prehľadným štýlom. Oceňujem, že autorka sa snažila zaviesť aj viaceré metodické postupy pre rýchlu a spoľahlivú detekciu vytipovaných enzýmov. Nosnou časťou dizertačnej práce sú autorkine výsledky, ktoré sú rozdelené na tri hlavné časti: a) vývoj a porovnanie analytických metód stanovenie aktivít katalázy, superoxiddismutázy, peroxidázay a lipoxygenázy, b) stanovenie nízkomolekulových a enzýmových antioxidantov v jačmeni a slade, a c) sledovanie zmien zložiek antioxidačného komplexu a antioxidačných parametrov v ľudskom organizme. V prvej časti výsledkov autorka optimalizovala vplyv niektorých parametrov vplývajúcich na aktivity katalázy, superoxiddismutázy, peroxidázay a lipoxygenázy. Navyše, autorka validovala metódu stanovenia aktivity superoxiddismutázy. Druhá časť práce je len súhrnom stanovení aktivít enzýmových antioxidantov (superoxiddismutáza, kataláza, peroxidáza a lipoxygenáza) a niektorých nízkomelokulárnych antioxidantov (vitamín E, luteín, -karotén) v rôznych vzorkách jačmeňa a sladu. Tretia časť práce je zameraná na sledovanie biochemických parametrov (vplývajúcich na antioxidačný status ľudského organizmu. Výsledková časť je bohatá na tabuľky a grafy názorne dokumentujúce získané údaje. V grafoch a tabuľkách však nie sú uvádzané experimentálne odchýlky, čo logicky indukuje otázku, že koľko krát boli experimenty opakované a aká bola reprodukovateľnosť výsledkov? Výsledky sú nakoniec diskutované, kde autorka prezentovala svoje vlastné pohľady na experimenty. Celá práca je sumarizovaná v záveroch a zakončená 161 citáciami svetovej literatúry vrátane niektorých autorkiných publikácií a konferenčných príspevkov. Aj napriek množstvu sledovaných antioxidačných parametrov či už na enzymatickej alebo metabolickej úrovni, hlavný nedostatok výsledkov a diskusie k druhej a tretej časti práce je zlyhanie prepojenia nameraných výsledkov s ich analytickým zhodnotením. Aký je súvis medzi jednotlivými aktivitami enzýmov, nameranými hladinami metabolitov a antioxidačným statusom daných biologických materiálov? Navyše, v druhej časti práce autorka vôbec neuvádza stanovenie celkových antioxidačných vlastností extraktov jačmeňa a sladu. Odporúčam autorke zhodnotiť v rámci obhajoby svojej dizertačnej práce celkový antioxidačný status týchto biologických matríc vo vzťahu k nameraným hodnotám. Záverom by som chcel vyzdvihnúť prednosti predkladanej dizertačnej práce ale zároveň aj poukázať na nedostatky práce, ktorá bola zameraná na štúdium aktivít enzýmových a nízkomolekulárnych antioxidačných systémov. Práca je postavená na množstve vykonaných experimentov, ktorá je základom pre ďalšie štúdie a rozvíjanie poznatkov v danej oblasti. Vzhľadom na vyššie uvedené skutočnosti a v súlade s článkom 46 Studijného a zkušebného řádu VUT v Brne odporúčam, aby po úspešnej obhajobe dizertačnej práce bola Ing. Simone Macuchovej v študijnom odbore Fyzikálna chémia udelená vedecká hodnosť phylosophy doctor (PhD)
eVSKP id 32747