Štúdium transglykozyláz kvasiniek

Loading...
Thumbnail Image
Date
ORCID
Mark
B
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract
Práca sa venuje štúdiu vlastností fungálnych transglykozyláz, konkrétne Phr1, Phr2 a Crh2, podieľajúcich sa na prestavbe bunkových stien kvasiniek v dôsledku štiepenia štrukturálnej polysacharidovej molekuly a prenosu jej časti na druhú (poly)sacharidovú-akceptorovú molekulu. Cicavčie bunky neobsahujú bunkové steny, teda ani transglykozylázy, preto sú tieto enzýmy vhodným cieľom pre pôsobenie antifungálnych látok. V rámci tejto diplomovej práce bol skúmaný účinok 67 komerčne dostupných inhibítorov na enzýmy Phr1 a Phr2 pomocou rýchleho skríningu. V prípade enzýmu Phr1 vykazovali dva inhibítory potenciálny účinok, ktorý bol overený na kolóne s molekulovým sitom pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie. Zistilo sa, že ani jedna z testovaných látok nemala inhibičný vplyv na Phr1 alebo Phr2, na rozdiel od DMSO, v ktorom boli inhibítory rozpustené. Spôsob účinku Phr enzýmov bol študovaný pomocou tenkovrstvovej a vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie. Prvý spôsob umožnil monitorovať tvorbu produktov iba v neskorších štádiách reakcie, ale metóda HPLC s delením reakčnej zmesi molekulovým sitom umožnila sledovať vznik produktov aj v počiatkoch reakcie. Enzým Phr1 štiepi donorový substrát blízko neredukujúceho konca, čím vznikajú malé fragmenty, ktoré sú prenášané na značené akceptory počas celej reakcie. Enzým Phr2 pôsobí náhodne, čím od počiatku reakcie vznikajú aj produkty s vyššou molekulovou hmotnosťou. Práca sa venovala aj štúdiu stupňa polymerizácie akceptora na jeho afinitu s enzýmom Crh2. Michaelis-Mentenovej konštanty nevykazovali žiaden vplyv stupňa polymerizácie na afinitu akceptora s enzýmom Crh2.
This study is interested in properties of fungal transglycosylases, specifically Phr1, Phr2 and Crh2. These enzymes are involved in the remodelling of yeast cell walls due to their cleavage of structural donor polysaccharides and transfer of their fragments to the other acceptor (poly)saccharide molecules. The mammalian cells do not contain cell walls, nor cell wall transglycosylases, that´s why these enzymes are possible targets for antifungal agents. In this diploma thesis the effect of 67 commercially available inhibitors on Phr1 and Phr2 enzymes was studied by rapid screening. In the case of the Phr1 enzyme, two inhibitors showed a potential effect which was subsequently tested by size exclusion chromatography column incorporated into HPLC device. None of the inhibitors were found to have an inhibitory effect on Phr1 or Phr2 enzymes in contrast to DMSO in which all inhibitors were dissolved. The mode of action of Phr enzymes was also studied by thin layer chromatography and high performance liquid chromatography. The first method allowed to monitor the formation of products only in the later stages of the reaction, but more sensitive size exclusion chromatography showed the product formation at the beginning of the reaction. Phr1 cleaved the donor substrate near the non-reducing end and forms small fragments that are transfered to labeled acceptors during the whole reaction. Phr2 utilized random action pattern, thus creating products with higher molecular weight from the beginning of reaction. The effect of the polymerization degree of acceptor on it´s affinity with the Crh2 was also studied. The Michaelis-Menten constants showed no effect of acceptor lenght on the affinity between enzyme and substrate.
Description
Citation
ČURILLOVÁ, N. Štúdium transglykozyláz kvasiniek [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2020.
Document type
Document version
Date of access to the full text
Language of document
sk
Study field
Potravinářská chemie a biotechnologie
Comittee
prof. RNDr. Ivana Márová, CSc. (předseda) doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (místopředseda) doc. Ing. Stanislav Obruča, Ph.D. (člen) prof. Ing. Stanislav Kráčmar, DrSc. (člen) doc. Ing. Adriána Kovalčík, Ph.D. (člen) doc. Mgr. Václav Brázda, Ph.D. (člen)
Date of acceptance
2020-06-23
Defence
1. Diplomantka seznámila členy komise s náplní a cílem diplomové práce. 2. Byly přečteny posudky na diplomovou práci. 3. Diplomantka akceptovala všechny připomínky vedoucí práce i oponentky a na všechny jejich otázky odpověděla v plné šíři. Diskuse: prof. Márová: Kultivace probíhala pouze v baňkách? doc. Diviš: V diskuzích neuvádíte příliš mnoho citací, jedná se tedy ve vašem případě o unikátní směr práce, nebo existuje více studií na toto téma? doc. Obruča: V práci jste stanovila, že DMSO působil jako inhibitor. Bylo by ho tedy možné využít při léčbě mykóz? doc. Brázda: Jakou koncentraci ethanolu jste využila na indukci? Diplomantka velmi pohotově reagovala na všechny doplňující otázky členů komise, které byly v průběhu diskuze k dané problematice vzneseny. V diskuzi diplomantka prokázala schopnost orientace v dané problematice a rovněž výborné teoretické i praktické znalosti v daném oboru. Po diskusi následovalo hodnocení závěrečné práce. Diplomantka prokázala nejen výborné znalosti, ale i schopnost samostatné prezentace získaných výsledků.
Result of defence
práce byla úspěšně obhájena
Document licence
Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení
DOI
Collections
Citace PRO