Studium stability vezikulárních systémů pomocí technik fluorescenční spektroskopie
Loading...
Date
Authors
ORCID
Advisor
Referee
Mark
A
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract
Tato práce se zabývá studiem stability a fúze kataniontových vezikulárních systémů na bázi CTA-DS pomocí Försterova rezonančního přenosu energie (FRET). Pro měření bylo použito metody Time-Correlated Single Photon Counting. Nejprve byly změřeny excitační a emisní spektra sond z prostředí kataniontových vezikul a byly navrhnuty donor-akceptorní páry: 5-hexadecanoylaminofluorescein s Oktadecyl Rhodaminem B, Bodipy 493/503 s Oktadecyl Rhodaminem B nebo DiI, Perylen s 5-hexadecanoylaminofluoresceinem a DiO s DiI. Poté byla provedena měření dob života vybraných párů z prostředí vezikul o různém obsahu cholesterolu za účelem sledování FRET umožněného fúzí vezikul. Bylo zjištěno, že není možné použít DiO jako donor, jelikož dochází k jeho nízké solubilizaci do vezikul. Také nebylo možné použít Bodipy, jelikož byla prokázána tvorba jeho excimerů. Při použití fluoresceinu jako donoru bylo zjištěno, že mezi jeho molekulami dochází k homo-fret, proto do systému byly přidány pouze neznačené vezikuly a tímto způsobem bylo možné fúzi detekovat, a to až na výjimky i v delším období. Také u páru perylen-fluorescein byla prokázána schopnost sledovat fúzi vezikul, ale s výjimkou systému s obsahem cholesterolu 43 mol. % pouze v krátkém časovém úseku.
This thesis is focused on possibility of studying stability and fusion of catanionic vesicles with Förster resonance energy transfer. The mainly used technique was Time-Correlated single photon counting. Firstly, excitation and emission spectra of chosen probes were measured and donor-acceptor pairs were suggested: 5-hexadecanoylaminofluorescein with Octadecyl Rhodamine B, Bodipy 493/503 with rhodamine or DiI, perylene with fluorescein, DiO with DiI. Then, time-resolved measurements of suggested pairs from environment of catanionic vesicles with different content of cholesterol were made in order to track the FRET associated with fusion of vesicles. It was found out, that it is not possible to use DiO as a donor because of it’s inefficient solubilisation into vesicles. It is also not possible for Bodipy to be used as a donor, because of it‘s excimer formation. In case of using fluorescein as a donor, it was found, that there is ongoing homo-fret between fluorescein molecules. Thanks to this, fusion was tracked by addition of unstained vesicles. It was also possible to track fusion in longer period of time. Also perylene-fluorescein pair was found to be capable of tracking the fusion, but with the exception of vesicles with content of cholesterol of 43 mol. %, tracking of fusion was possible only in short period of time.
This thesis is focused on possibility of studying stability and fusion of catanionic vesicles with Förster resonance energy transfer. The mainly used technique was Time-Correlated single photon counting. Firstly, excitation and emission spectra of chosen probes were measured and donor-acceptor pairs were suggested: 5-hexadecanoylaminofluorescein with Octadecyl Rhodamine B, Bodipy 493/503 with rhodamine or DiI, perylene with fluorescein, DiO with DiI. Then, time-resolved measurements of suggested pairs from environment of catanionic vesicles with different content of cholesterol were made in order to track the FRET associated with fusion of vesicles. It was found out, that it is not possible to use DiO as a donor because of it’s inefficient solubilisation into vesicles. It is also not possible for Bodipy to be used as a donor, because of it‘s excimer formation. In case of using fluorescein as a donor, it was found, that there is ongoing homo-fret between fluorescein molecules. Thanks to this, fusion was tracked by addition of unstained vesicles. It was also possible to track fusion in longer period of time. Also perylene-fluorescein pair was found to be capable of tracking the fusion, but with the exception of vesicles with content of cholesterol of 43 mol. %, tracking of fusion was possible only in short period of time.
Description
Citation
MÁČALA, J. Studium stability vezikulárních systémů pomocí technik fluorescenční spektroskopie [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2020.
Document type
Document version
Date of access to the full text
Language of document
cs
Study field
Chemie pro medicínské aplikace
Comittee
prof. Ing. Miloslav Pekař, CSc. (předseda)
prof. RNDr. Ivana Márová, CSc. (místopředseda)
doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (člen)
doc. Ing. Petr Dzik, Ph.D. (člen)
doc. Ing. Stanislav Obruča, Ph.D. (člen)
prof. RNDr. Zbyněk Zdráhal, Dr. (člen)
Date of acceptance
2020-09-03
Defence
Obhajoba diplomové práce proběhla podle následujícího schématu: prezentace studenta-vyjádření vedoucí/ho-oponentský posudek-reakce na posudek-diskuse s komisí. Student přednesl výborný výtah výsledků své práce, řádně zodpověděl všechny dotazy oponentské i členů komise, pohotově reagoval na připomínky. V diskusi tak student prokázal výbornou schopnost orientace v teoretických i praktických základech problematiky práce. Komise zhodnotila jeho práci celkově jako výbornou.
Otázky vznesené během diskuse:
Pekař: Máte fůzi vezikul potvrzenou? Nemůže docházet pouze k tvorbě krátkodobých asociátů?
Márová: Podle čeho byla volena koncentrace cholesterolu? Termín „molární koncentrace 43%“ znamená co? Jaké bylo složení vašich formulací?
Result of defence
práce byla úspěšně obhájena
Document licence
Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení