Ovlivnění molekulové hmotnosti kyseliny hyaluronové změnou fermentačního procesu

Loading...
Thumbnail Image
Date
ORCID
Mark
A
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract
Biologická funkcia kyseliny hyalurónovej (HA) – polysacharidu pozostávajúceho z opakujúcich sa jednotiek N-acetylglukózamínu a kyseliny glukurónovej – má mimoriadne široký a často protikladný charakter v závislosti na jej molekulovej hmotnosti (MW). Bakteriálna produkcia poskytuje HA o vysokej MW a čistote. Cieľom tejto práce bolo kontrolovať molekulovú hmotnosť vznikajúcej HA prídavkom hyalurónidáz počas fermentácie. Pokles MW vedie ku zníženiu viskozity média, čo je predpokladom pre zvýšenie výťažku. HA bola pripravená vsádkovou kultiváciou mikroorganizmu Streptococcus equi subsp. zooepidemicus. V priebehu fermentácie bol do bioreaktorov pridávaný enzým hyaluronát 4-glykánohydroláza (BTH) rôznej koncentrácie v rôznom čase kultivácie. Bol sledovaný výťažok HA, molekulová hmotnosť a polydisperzita HA metódou GPC-MALLS, dynamická viskozita produkčného média a koncentrácia zbytkovej glukózy. Bol dosiahnutý vznik nízko aj strednemolekulárnej HA. Prídavok 10 U (BTH) / g (HA) nemal výrazný vplyv na MW, teda funkciu HA, výrazný pokles viskozity však uľahčil purifikáciu produktu. Potenciálne zvýšenie výťažku HA nebolo dokázané z dôvodu veľmi nízkej koncentrácie zbytkovej glukózy a kvôli spôsobu zrážania HA pri vzniku HA o strednej a nízkej MW.
The biological function of hyaluronic acid (HA) – the polysaccharide, which consists of repeating units of N-actylglucosamine and glucuronic acid – is extremely broad and often contradictory, depending on its molecular weight (MW). The bacterial production provides HA of high molecular weight and purity. The objective of this thesis is to control the molecular weight of produced HA by the addition of hyaluronidases during the process of fermentation, resulting in reduction of viscosity of the medium followed by increase of yield. Hyaluronic acid was prepared by batch fermentation of the microorganism Streptococcus equi subsp. zooepidemicus. During the process of fermentation, the enzyme hyaluronate 4-glycanohydrolase (BTH) at various concentrations and different times of cultivation was added to bioreactors. The HA yield, the molecular weight and the polydispersity by the SEC-MALLS were monitored, together with the residual glucose concentration and the dynamic viscosity of the production medium. The formation of low and medium molecular weight HA was achieved. The addition of 10 U (BTH) / g (HA) had no significant effect on the molecular weight and therefore the HA function, but the corresponding drop of viscosity was noteworthy for the simplification of the product purification. Potential increase in HA yield was not confirmed because of the very low concentration of residual glucose and the method of precipitating low and medium MW HA.
Description
Citation
WIKARSKÁ, M. Ovlivnění molekulové hmotnosti kyseliny hyaluronové změnou fermentačního procesu [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2017.
Document type
Document version
Date of access to the full text
Language of document
sk
Study field
Biotechnologie
Comittee
prof. RNDr. Ivana Márová, CSc. (předseda) doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (místopředseda) doc. Ing. Bohuslav Rittich, CSc. (člen) doc. RNDr. Alena Španová, CSc. (člen) doc. Ing. Stanislav Obruča, Ph.D. (člen) RNDr. Renata Mikulíková, Ph.D. (člen)
Date of acceptance
2017-06-20
Defence
1. Studentka seznámila členy komise s náplní a cílem bakalářské práce. 2. Byly přečteny posudky na bakalářskou práci. 3. Studentka akceptovala všechny připomínky oponenta a na všechny otázky odpověděla v plné šíři. Diskuse doc. Obruča: Chromatografická data, identifikované píky ?
Result of defence
práce byla úspěšně obhájena
Document licence
Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení
DOI
Collections
Citace PRO