Srovnání biotechnologických postupů přípravy čistých proteinů
Loading...
Date
Authors
ORCID
Advisor
Referee
Mark
A
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract
Produkcia rekombinantných proteínov je biotechnologický proces, počas ktorého vznikajú proteíny v cudzorodom organizme manipuláciou genetickej informácie. Gén, ktorý kóduje žiadanú bielkovinu sa vyizoluje, vloží sa do expresného vektoru za vzniku rekombinantného plazmidu. Pomocou fyzikálnych alebo chemických metód sa následne plazmid transformuje do vhodného hostiteľa, kde sa realizuje genetická informácia za vzniku rekombinantného proteínu. Teoretická časť práce zahrňuje charakteristiku proteínov a ich vlastnosti, popis prípravy rekombinantného proteínu a porovnáva jednotlivé expresné systémy. Pre spracovanie experimentálnej časti boli vybraté tri izoformy proteínu p53, ktoré boli počas práce syntetizované v mikroorganizme E.coli. Transformovaný rekombinantný plazmid obsahoval dve značky na purifikáciu, HIS-tag a GST-tag, vďaka čomu bolo možné porovnať účinnosť izolácie týchto dvoch metód. Bolo zistené, že u všetkých troch izoforiem boli získané vyššie koncentrácie pri purifikácií s HIS-tagom ako u GST-tag. Proteíny p53 majú veľkosť okolo 50 kDa, čo bolo potvrdené gélovou elektroforézou v polyakrylamidovom géle s dodecylsulfátom sodným.
The production of recombinant proteins is a biotechnological process during which proteins are produced in foreign organisms by gen manipulation. To form a recombinant plasmid the gene encoding the desired protein is isolated and inserted into an expression vector. The plasmid is then transformed using physical or chemical method into a suitable host, where the recombinant gene is translated into amino acid sequence in the newly synthetized protein. The theoretical part of this bachelor thesis includes characteristics of proteins, methods of recombinant protein preparation and compares individual expression systems. Three isoforms of the p53 protein, which were synthesized in the E. coli microorganism, were selected for processing the experimental part. The transformed recombinant plasmid contained two tags for purification, HIS-tag and GST-tag, making it possible to compare the efficacy of the two purification methods. HIS-tag purification was found to work for all three isoforms better, with concentrations of recombinant proteins were several times higher than those of the GST-tag. The p53 proteins are about 50 kDa long, what was confirmed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis.
The production of recombinant proteins is a biotechnological process during which proteins are produced in foreign organisms by gen manipulation. To form a recombinant plasmid the gene encoding the desired protein is isolated and inserted into an expression vector. The plasmid is then transformed using physical or chemical method into a suitable host, where the recombinant gene is translated into amino acid sequence in the newly synthetized protein. The theoretical part of this bachelor thesis includes characteristics of proteins, methods of recombinant protein preparation and compares individual expression systems. Three isoforms of the p53 protein, which were synthesized in the E. coli microorganism, were selected for processing the experimental part. The transformed recombinant plasmid contained two tags for purification, HIS-tag and GST-tag, making it possible to compare the efficacy of the two purification methods. HIS-tag purification was found to work for all three isoforms better, with concentrations of recombinant proteins were several times higher than those of the GST-tag. The p53 proteins are about 50 kDa long, what was confirmed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis.
Description
Citation
BUŠANSKI, P. Srovnání biotechnologických postupů přípravy čistých proteinů [online]. Brno: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická. 2019.
Document type
Document version
Date of access to the full text
Language of document
sk
Study field
Biotechnologie
Comittee
prof. RNDr. Ivana Márová, CSc. (předseda)
doc. Ing. Stanislav Obruča, Ph.D. (místopředseda)
doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (člen)
doc. Mgr. Václav Brázda, Ph.D. (člen)
doc. Ing. Eva Vítová, Ph.D. (člen)
RNDr. Renata Mikulíková, Ph.D. (člen)
doc. Ing. Adriána Kovalčík, Ph.D. (člen)
Date of acceptance
2019-06-18
Defence
1. Student seznámil členy komise s náplní a cílem bakalářské práce.2. Byly přečteny posudky na bakalářskou práci.3. Studentka akceptoval všechny připomínky oponenta a na všechny otázky odpověděl v plné šíři.Diskuseprof. Márová: V prezentaci uvádíte jednotku ml/mg, můžete jí vysvětlit?doc. Obruča: Byly gely z elektroforézy PAGE-SDS barveny i stříbrem?Po diskuzi následovalo hodnocení závěrečné práce. Student prokázal výbornou orientaci v dané problematice i schopnost samostatné prezentace získaných výsledků.
Result of defence
práce byla úspěšně obhájena
Document licence
Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení